Шифф йодная кислота

Шифф йодная кислота

Периодная кислота – Шифф ( PAS ) — это метод окрашивания, используемый для обнаружения в тканях полисахаридов, таких как гликоген , и слизистых веществ, таких как гликопротеины , гликолипиды и муцины. Реакция периодической кислоты окисляет вицинальные диолы в этих сахарах , обычно разрывая связь между двумя соседними атомами углерода, не участвующими в гликозидной связи или замыкании кольца в кольце моносахаридных единиц, которые являются частью длинных полисахаридов, и создавая пару из альдегидов на два свободных концах каждого сломанного моносахаридакольцо. Условия окисления должны в достаточной мере регулироваться, чтобы не окислять альдегиды в дальнейшем. Эти альдегиды затем реагируют с реактивом Шиффа, давая пурпурно-пурпурный цвет. Подходящее базовое пятно часто используется как контрастное пятно .

• Окраска диастазы PAS (PAS-D) — это окраска PAS, используемая в сочетании с диастазой , ферментом , расщепляющим гликоген.

• Альциановый синий / периодическая кислота — Шифф (AB / PAS или AB-PAS) использует альциановый синий перед шагом PAS.

Содержание

  • 1 Использует
  • 2 Смотрите также
  • 3 Ссылки
  • 4 внешние ссылки

Использует

Окрашивание PAS в основном используется для окрашивания структур, содержащих высокую долю макромолекул углеводов ( гликоген , гликопротеин , протеогликаны ), обычно обнаруживаемых, например, в соединительных тканях , слизи , гликокаликсе и базальных пластинках .

Окрашивание PAS может использоваться для диагностики нескольких заболеваний:

  • Болезнь накопления гликогена (по сравнению с другими нарушениями накопления).
  • Аденокарциномы , которые часто выделяют нейтральные муцины.
  • Болезнь Педжета груди .
  • Саркома альвеолярной мягкой части .
  • Окрашивание макрофагов при болезни Уиппла .
  • Его можно использовать для диагностики дефицита α1-антитрипсина при положительном окрашивании перипортальных гепатоцитов печени.
  • Агрегаты PAS-положительных лимфоцитов присутствуют в эпидермисе при грибковом микозе и синдроме Сезари , которые называются микроабсцессами Путрие.
  • Саркома Юинга
  • Эритролейкоз , лейкоз незрелых эритроцитов. Эти клетки окрашивают в яркий фуксию.
  • Легочный альвеолярный протеиноз .
  • Грибковаяинфекция , клеточные стенки грибов окрашиваются в пурпурный цвет; это работает только с живыми грибами. В отличие от этого, окрашивание метенамином серебра (GMS) Grocott окрашивает как живые, так и мертвые грибковые организмы.
  • Он используется для определения гликогена в образцах биопсии легких у младенцев с легочным интерстициальным гликогенозом (PIG).
  • Его можно использовать для выделения суперсшитых липидных включений при цероидном липофусцинозе (NCL).

Присутствие гликогена можно подтвердить на срезе ткани, используя диастазу для переваривания гликогена из среза, а затем сравнивая срез PAS, расщепленный диастазой, с нормальным срезом PAS. Слайд с отрицательной диастазой покажет пурпурное окрашивание там, где гликоген присутствует в срезе ткани. На предметном стекле, обработанном диастазой, не будет положительного окрашивания PAS в тех местах на предметном стекле.

Окрашивание PAS также используется для окрашивания целлюлозы . Одним из примеров может быть поиск имплантированных медицинских устройств, состоящих из неокисленной целлюлозы.

Если окрашивание PAS будет производиться на ткани, рекомендуемым фиксатором будет 10% формалин с нейтральным буфером или раствор Буэна . Для мазков крови рекомендуемый фиксатор — метанол . Глутаральдегид не рекомендуется, поскольку свободные альдегидные группы могут вступать в реакцию с реагентом Шиффа , что может привести к ложноположительному окрашиванию.

Читайте также:  Заболевание нефролитиаз

Полисахариды — высокомолекулярные сахара, встречающиеся в тканях организма как в чистом виде (гликоген), так и в соединении с другими веществами (гликопротеиды, протеогликаны).

Наиболее распространенными методами выявления полисахаридов являются: окраска объектов кармином по Бесту и ШИК-реакция.

1. Выявление кармином по методу Беста — эмпирический способ и не отвечает строгим гистохимическим требованиям. Он широко распространен в гистохимической практике благодаря доступности и яркости. Метод основан на окраске срезов, залитых в парафин или целлоидин, водным раствором кармина. В результате гликоген окрашивается в ярко-красный цвет. При окраске кармином кроме гликогена могут окрашиваться некоторые клеточные гранулы, слизь, кутикулярные каемки эпителия и др. Поэтому всегда следует ставить контроль с диастазой.

2. ШИК — реакция (ШИФФ-йодная кислота). Метод основан на том, что периодат калия при воздействии на полисахариды избирательно окисляет спиртовые группы углеродных атомов гексозной части, превращая их в альдегидные. Свободные альдегидные группы затем реагируют с фуксин-сернистой кислотой, давая фиолетово-вишневое окрашивание.

1. Реактив Шиффа (фуксинсернистая кислота. 1 г основного фуксина растворяют в 200 мл дистиллированной воды (комнатной температуры), тщательно взбалтывая в течение 3-5 мин. Раствор фильтруют через бумажный фильтр. К фильтрату добавляют 10 мл 1 н. хлористоводородной кислоты и 1 г метабисульфита калия или натрия. Раствор в хорошо закрытой колбе помещают в темное место на 24 ч. После обесцвечивания фуксина реактив приобретает желтоватый или коричневый цвет в зависимости от качества основного фуксина. Для окончательной очистки фуксина от примесей добавляют к нему 3-5 растолченных таблеток активированного угля, хорошо взбалтывают и отфильтровывают в склянку с притертой пробкой. Реактив лучше хранить в холодильнике. С целью проверки качества полученного реактива Шиффа наливают в бюкс 5 мл реактива и добавляют в него 1 каплю неразведенного кислого формалина. Если реактив отличного качества, то он на глазах приобретает цвет основного фуксина.

2. Сернистая вода. К 200 мл дистиллированной воды добавляют 10 мл 10% раствора гидросульфита натрия (Na2SO3) и 10 мл 1 н. раствора хлористоводородной кислоты. Сернистая вода готовится перед употреблением и должна обладать характерным запахом диоксида серы (сернистого ангидрида (SO2).

Методика проведения окраски препаратов:

1. Материал фиксируют в 10 % формалине, жидкостях Карнуа, Ценкера, заливают в парафин.

2. Депарафинированные срезы доводят до дистиллированной воды.

3. При комнатной температуре срезы окисляют 0,5—1 % водным перийодатом калия в течение 2 —10 мин. Раствор хранят в темноте. Рабочую концентрацию этого раствора и продолжительность инкубации в ней подбирают в зависимости от объекта.

4. Промывают в дистиллированной воде 10 мин.

5. Помещают срезы в реактив Шиффа на 10-30 мин при комнатной температуре в темноте.

6. Срезы промывают сернистой водой три раза по 2 мин. Сернистую воду можно также готовить (непосредственно до проведения реакции).

7. Тщательно промывают в проточной и дистиллированной воде, ядра можно докрасить 0,5 % светлым зеленым или гематоксилином.

Читайте также:  Болит живот в области эпигастрия

8. Обезвоживают в спиртах возрастающей концентрации, заключают в бальзам.

Результат: углеводы, содержащие гексозу, окрашиваются в красно-лиловый цвет, гликоген — в более интенсивный темно-красный.

Контроль: расщепление гликогена амилазой или диастазой, реакция ацетилирования для блокирования гидроксильных групп.

Необходимо пользоваться химически чистой посудой, стеклянными палочками; нельзя работать с металлическими крючками или иголками; окрашивание срезов в реактиве Шиффа следует проводить в темноте.

При обильном выявлении ШИК-позитивного вещества цитоплазма клеток гомогенно окрашивается в фиолетово-вишневый цвет.

Дата добавления: 2014-01-15 ; Просмотров: 5150 ; Нарушение авторских прав?

Нам важно ваше мнение! Был ли полезен опубликованный материал? Да | Нет

Реакция Фельгена с реактивом Шиффа на ДНК

Реакция Фельгена указывает на присутствие ДНК, поэтому она прежде всего может быть использована для констатации наличия или отсутствия ядер в клетках, их размеров, формы, местоположения и т. д. Кроме того, интенсивность окрашивания может дать косвенные указания на количественные изменения ДНК.

Реактив Шиффа — фуксинсернистая кислота — является характерным реактивом на альдегиды. На свойстве реактива Шиффа взаимодействовать с альдегидными группами основана и реакция Фельгена с этим реактивом на ДНК. Однако, ввиду того что в молекуле ДНК альдегидные группы связаны, их надо предварительно освободить. Это достигается проведением гидролиза ДНК слабой кислотой, в результате которого происходит отщеплейие пуриновых оснований (аденина, гуанина) от молекулы ДНК и образуется остаток молекулы ДНК со свободными альдегидными группами:

Изменения возникают у первого углеродного атома дезоксирибозы; в месте отрыва пуриновых оснований выявляется потенциальная альдегидная группа. При. этом фуранозная форма дезоксирибозы превращается в форму нециклического сахара. В процессе реакции к двум альдегидным группам дезоксирибозы присоединяется одна молекула фуксинсернистой кислоты.

Фуксинсернистая кислота (лейкофуксин) получается из кислого раствора основного фуксина (парафуксина) в 1 н. соляной кислоте при насыщении его сернистым ангидридом. Сернистый ангидрид образуется при взаимодействии соляной кислоты с бисульфитом натрия, которые вносятся в кислый раствор основного фуксина:

При пропускании сернистого газа в раствор фуксина нарушаются две двойные связи, в одном из трех ароматических колец фуксина исчезает хиноидная группировка, а вместе с ней и лилово-красная окраска, свойственная фуксину. Фуксинсернистая кислота — непрочное бесцветное соединение.

Получение фуксинсернистой кислоты из основного фуксина протекает следующим образом: фуксин, взаимодействуя с соляной кислотой, образует комплексное соединение, которое далее реагирует с сернистой кислотой по следующей схеме:

Таким образом, при образовании фуксинсернистой кислоты к фуксину присоединяются две группы (-SO2H).

При реакции с альдегидами хиноидная группировка восстанавливается, так как фуксинсернистая кислота — неустойчивое соединение, разлагается с образованием сернистой кислоты.

При взаимодействии одной молекулы фуксинсернистой кислоты с двумя молекулами остатков ДНК, имеющих обнаженные альдегидные группы, получается одна молекула окрашенного соединения.

При подготовке материала для проведения реакции Фельгена обычно рекомендуют фиксацию в спиртовых и кислых фиксаторах. Чаще всего применяют фиксатор Карнуа (стр. 45). Такой фиксатор осаждает нуклеопротеиды, что приводит к удачным морфологическим картинам. Однако длительное пребывание материала в фиксаторе вызывает разрушение связи между нуклеиновыми кислотами и белками, приводит к постепенной экстракции нуклеиновых кислот и дает искаженную картину. Поэтому пребывание в фиксаторе надо максимально ограничивать.

Читайте также:  Астено невротический синдром диссомния

1) Реактив Шиффа (фуксинсернистая кислота).

Приготовление реактива Шиффа. 1 г основного фуксина растереть в ступке и растворить в 200 мл кипящей дистиллированной воды; охладить до 50°С. В охлажденный раствор добавить 20 мл 1 н. соляной кислоты * и охладить до 25°С. Добавить 1 г бисульфита или метабисульфита натрия. Полученную смесь взболтать с активированным углем (от 1 да 3 мин) и профильтровать. Налить в темный или завернутый в темную бумагу сосуд, закрыть его притертой пробкой и поместить в темноту на 12 или более часов до обесцвечивания основного фуксина и образования фуксинсернистой кислоты.

* ( 1 н. соляная кислота соответствует 10%-ному раствору, приготовленному из концентрированной соляной кислоты (уд. в. 1,19))

2) Сернистая вода.

Приготовление сернистой воды. К 200 мл дистиллированной воды добавить 20 мл 1 н. соляной кислоты и 1 г бисульфита натрия.

3) 1 н. соляная кислота.

4) Среды для обезвоживания объектов и заключения их в канадский бальзам (стр. 66-70).

5) Канадский бальзам.

Проведение реакции

* ( См. сноску на стр. 118.)

1. Погрузить препараты в 1 н. соляную кислоту на несколько секунд.

2. Перенести их в заранее нагретую до 60° С 1 н. HCl и поместить в термостат при температуре 60° С (или на водяную баню с такой же температурой) на 5-10 мин * .

* ( Длительность гидролиза зависит от примененного фиксатора. При употреблении фиксатора Карнуа и формалина оптимальное время 8 мин.)

3. Сполоснуть препараты холодной 1 н. HCl.

4. Поместить их в реактив Шиффа на 1 ч.

5. Отмыть избыток реактива Шиффа сернистой водой (3 смены по 3-5 мин).

6. Промывать препараты в водопроводной воде в течение 5-10 мин, сменяя начинающую розоветь воду.

7. Довести препараты до бальзама через 96%-ный, 100%-ный спирт, смесь спирта с ксилолом и ксилол.

8. Наблюдать появление малиновой окраски.

Результаты реакции (табл. 20)


Таблица 20. Реакция Фельгена. Кончик корешка лука. А — общий вид кончика корешка лука в разрезе; Б — детали строения кончика порошка лука; 1 — корневой чехлик; 2 — зона деления; 3 — зона растяжения (увеличение 7 X 8 и 7 X 40)

В кончике корешка лука ядра приобретают малиново-фиолетовую окраску. Ядра зоны растяжения и особенно всасывания выглядят несколько менее яркими, чем ядра зоны деления. Ядрышки, цитоплазма и оболочки клеток остаются неокрашенными.

В зерновке кукурузы ядра корешка, почечки и всех остальных тканей зародыша, а также клеток алейронового слоя окрашиваются в характерный для реакции Фельгена цвет. Сплюснутые и растянутые ядра клеток эндосперма окрашиваются более бледно.

Станьте одним из тех удачников, которые получат добротное прислуживание от самых изящных индивидуалок. Всегда соблазнительные шлюхи с вашего двора ежедневно удовлетворяют молодых людей разными способами .

Ссылка на основную публикацию
Шипы в коленях лечение
Я долго искала СОЛЕВЫЕ ШИПЫ НА КОЛЕННОМ СУСТАВЕ . Проблема решена! СОЛЕВЫЕ ШИПЫ НА КОЛЕННОМ СУСТАВЕ ЖЕЛЕЗНАЯ ГАРАНТИЯ, а между...
Чувство тошноты по вечерам
Тошнота и рвота сопровождают множество болезней, а в некоторых случаях присоединение данной симптоматики свидетельствует об ухудшении состояния здоровья. Однако зачастую...
Чувство тревоги и беспокойства ночью
Панические атаки ночью могут приводить к временному параличу и беспричинному страху. Подобное состояние будет мешать полноценно отдыхать, это приведет к...
Шипы на костях
Боль и неприятные ощущения в позвоночнике — возможные виновники — это остеофиты позвоночника, маячки сигнализирующие об изменениях в функционировании позвоночника....
Adblock detector